Pytanie 54
Pewien student zamierzał otrzymać bibliotekę z mutacjami kasetowymi w obrębie centrum aktywnego enzymu XYZ. Gen XYZ dał do wektora pUC18, wstawił go tak, że nie zaburzał ramki odczytu LacZ', czyli gdy dało sie do odpowiedniej komórki (takiej, w której daje sie prowadzić selekcję biało-niebieską) powstaje aktywna B-galaktozydaza. wyciął
kasetę, którą chciał zmienić, oddzielił przez elektroforezę od reszty wektora, wziął wektor bez kasety i fosfatazą usunął reszty fosforanowe z 5' końców - żeby nie doszło do samoligacji wektora, po czym dodał syntetyczne oligonukleotydy.
te co sie same zligowaly stanowia jedynie 1,2 % w porownaniu do eksperymentu kontrolnego gdzie nie było defosforylacji
rekombinanty nie będą niebieskie
rekombinanty będą niebieskie
te co się same zligowały (nierekombinanty) nie beda niebieskie
w komorkach nie bedzie aktywnosci enzymu XYZ